“你是否好奇，多肽药物与小分子药物相比，它们有何独特之处？质量研究的道路上，多肽药物又面临着哪些前所未有的挑战？是序列的精确无误，还是结构的微妙变化？是杂质的严格把控，还是稳定性的不懈追求？跟随本文，我们一同深入多肽药物的神秘世界，揭开质量研究的层层面纱，探寻那些指导原则背后的智慧与奥秘！”

▲ 全文大纲

一、引言

多肽是由多个氨基酸通过肽键相连而成的一类化合物，它们在生物体内广泛存在，并扮演着激素、神经递质、细胞生长因子等关键角色，参与调节多种生理过程。与传统的小分子化学药物相比，多肽类药物在结构及作用机制上存在着本质的区别。

多肽类药物的分子量通常介于小分子化学药物与蛋白质药物之间，其复杂性和多样性远高于传统的小分子药物。小分子化学药物通常由相对简单的化学结构组成，分子量较小，而多肽则包含多个氨基酸残基，通过肽键连接形成具有特定构象的分子链。这种复杂的结构赋予了多肽类药物高度的特异性和选择性，使其在治疗疾病时能够更精确地靶向病变部位，减少副作用。

目前，市场上热销的多肽类药物成逐年递增趋势，例如，用于治疗糖尿病的GLP-1受体激动剂（如诺和诺德的Ozempic、Wegovy和礼来的Zepbound）以及用于治疗多发性硬化症的醋酸格拉替雷（商品名Copaxone®及其长效版本GA Depot）等，均是多肽类药物领域的明星产品。

由于其结构的复杂性和生物活性的高度敏感性，多肽药物在研发和生产过程中会出现各种各样的质量问题。一方面，多肽药物在常温下容易发生脱酰胺、氧化、水解等化学反应，导致其结构发生变化和活性丧失；另一方面，多肽药物在体内的稳定性和生物利用度也受到多种因素的影响，如酶的降解、免疫原性反应等。

因此，多肽药物的质量研究与小分子药物即存在相似的地方，也存在很多差异，本文将结合多肽药物的特性对其质量研究的特殊要求进行讲解，对于与小分子药物相同的质量研究手段可参考前文（19）和（20），这里不再赘述。

正 文

二、多肽质量研究的特殊性

鉴于多肽药物位于小分子化学药物与大分子生物制剂之间的独特地位，其质量研究参数的考量同样融合了这两类药物的特点，但相较于小分子药物，多肽药物在质量研究上展现出更为复杂和独特的需求。以下，我们将重点阐述与小分子药物在质量研究参数上存在的显著差异。

2.1 结构确证

小分子药物一般只存在一级结构，而多肽类药物由于其分子结构更加复杂，往往存在二级、三级甚至四级等高级结构，这也让其结构确证的难度极大增加，以下对多肽药物的各级结构确证方法进行讲解。

2.1.1 一级结构分析

多肽药物的一级结构，也称为初级结构或基本结构，是指多肽链中氨基酸的种类、数量以及它们的连接顺序。以下是几种常用的一级结构确证方法及其原理：

Edman降解法

原理：Edman降解法是一种经典的肽链N端测序方法，由瑞典化学家Peder Edman在1950年代发展而来。该方法基于异硫氰酸苯酯（PITC）与N端氨基的特异性反应，生成苯氨基硫甲酰衍生物，随后在弱碱性条件下断裂第一个肽键，释放出N端氨基酸的噻唑啉酮衍生物，该衍生物具有紫外吸收特性，可通过色谱法或质谱法检测鉴定。通过重复此过程，可以逐步解析出整个肽链的N端序列。

特点：Edman降解法准确度高，适用于短肽和中等长度肽的N端测序，但对C端序列的测定则无能为力。此外，该方法操作复杂，耗时较长，且对样品纯度要求较高。

质谱法（MS）

原理：质谱法是一种基于样品离子化和质荷比分析的检测方法，广泛应用于多肽和蛋白质的结构鉴定。在多肽药物一级结构确证中，质谱法主要通过多级质谱联用（MS-MS）技术实现。该技术首先将多肽分子离子化，然后在质谱仪中通过高能碰撞诱导解离（CID）等方式使肽键断裂，产生一系列碎片离子。这些碎片离子的质荷比与多肽序列中的特定氨基酸或肽段相对应，通过解析这些碎片离子的质谱图，可以推断出多肽的氨基酸序列。

特点：质谱法具有高通量、高灵敏度和高准确度的优点，适用于复杂多肽混合物的分析和鉴定。随着质谱技术的不断发展，如高分辨率质谱（HR-MS）和同位素标记技术的应用，质谱法在多肽药物一级结构确证中的应用越来越广泛。

2.1.2 高级结构分析

多肽药物的二级结构是指在一级结构的基础上，多肽链中局部主链的空间排布和构象。这种结构主要由氢键等弱相互作用力维持，包括α-螺旋、β-折叠、β-转角和无规则卷曲等几种基本形式。二级结构的形成对于多肽药物的稳定性、溶解性和生物活性具有重要影响。

α-螺旋：多肽链中的氨基酸残基围绕中心轴呈右手螺旋式上升排列，每3.6个氨基酸残基上升一圈，螺距为0.54nm。α-螺旋是蛋白质中最常见、最稳定的一种二级结构。

β-折叠：多肽链的某些区段以平行或反平行的方式折叠成锯齿状结构，肽键平面之间呈110°夹角，并通过氢键维持稳定。

β-转角：多肽链中局部肽链主链发生180°回折，形成的一种特殊结构。它通常出现在α-螺旋和β-折叠之间，作为连接这两种二级结构的桥梁。

无规则卷曲：多肽链中未被纳入α-螺旋、β-折叠等规则二级结构中的肽段，其构象相对灵活多变。

多肽药物的三级结构，也称为空间构象或高级结构，是指多肽链在二级结构（如α-螺旋、β-折叠等）的基础上进一步折叠和盘绕所形成的三维空间结构。这种结构主要由多肽链内部的非共价键（如疏水作用、氢键、离子键、范德华力以及二硫键等）维持，并决定了多肽药物的生物活性和功能特性。

多肽药物的四级结构是指由两个或更多个具有独立三级结构的多肽链（也称为亚基）通过非共价键（如氢键、疏水作用、离子键等）相互结合而形成的复合生物大分子结构。

以下是几种常用的高级结构确证方法及其原理：

圆二色谱法（CD）

原理：圆二色谱法是一种基于光学活性的检测方法，能够测量多肽链在特定波长下对左右圆偏振光的吸收差异。由于α-螺旋、β-折叠等二级结构对圆偏振光的吸收具有特定的光谱特征，因此可以通过分析圆二色谱图来推断多肽的二级结构类型及其含量。

特点：圆二色谱法具有快速、无损、灵敏度高等优点，是研究多肽和蛋白质二级结构的重要工具之一。

核磁共振法（NMR）

原理：核磁共振法利用原子核在外磁场中的共振现象来研究分子的结构和动力学性质。在多肽药物二级结构确证中，NMR技术可以通过测量多肽链中原子核（如^1H、^13C、^15N等）的共振频率和化学位移等信息，来推断多肽链的局部构象和空间排布。

特点：NMR法能够提供丰富的结构信息，包括原子间的距离、角度和动力学参数等，对于复杂多肽和蛋白质的结构研究具有重要意义。然而，NMR法对样品纯度和浓度要求较高，且实验设备昂贵、操作复杂。

傅里叶变换红外光谱(FTIR)

原理：FTIR利用红外光的吸收特性来研究化合物的结构和成分。当红外光照射到多肽样品上时，样品中的分子会吸收与其振动和转动频率相匹配的红外光，导致分子能级的变化。通过测量并记录这些变化，可以得到样品的红外光谱图。

特点：FTIR光谱图能够显示多肽药物中不同化学键和官能团的吸收特性，从而提供关于其高级结构的间接信息。特别是通过分析红外光谱图中的特定吸收峰，可以推断出多肽链中的氢键、酰胺键等关键结构元素的存在和变化。

拉曼光谱

原理：拉曼光谱是一种基于拉曼散射效应的光谱技术，它利用光子与分子振动、转动能级的相互作用来获取分子结构信息。当激光照射到多肽样品上时，样品中的分子会吸收激光能量并发生振动或转动能级的跃迁，随后释放出散射光。通过分析散射光的频率变化（拉曼频移），可以推断出分子的振动模式和结构特征。

特点：拉曼光谱与FTIR互补，能够提供更多关于多肽药物非极性键和骨架振动的信息。通过拉曼光谱分析，可以揭示多肽链中特定化学键的振动模式和构象变化，进而了解其高级结构特征。

原理：XRD利用晶体对X射线的衍射现象来解析化合物的晶体结构。当X射线照射到多肽晶体上时，会发生衍射现象，通过测量和分析这些衍射光束的强度和方向，可以推断出晶体中原子的排列方式和结构信息。

特点：虽然XRD更常用于晶体结构的研究，但在某些情况下（如多肽药物形成微晶或纳米晶时），XRD也可用于分析其高级结构特征。然而，由于多肽药物在溶液中通常不以晶体形式存在，因此XRD在高级结构研究中的应用相对有限。

2.2 鉴别

2.2.1 氨基酸组成

多肽药物由多个氨基酸通过肽键连接而成，其一级结构（即氨基酸序列）决定了其高级结构和生物功能。氨基酸组成检测的原理在于，通过一系列化学和物理手段，将多肽链断裂为单个氨基酸，并利用色谱技术对这些氨基酸进行分离和定量分析，从而确定多肽药物中各种氨基酸的种类和相对含量。

2.2.2 肽图

肽图分析是基于多肽的分子量大小以及氨基酸组成特点，使用专一性较强的蛋白水解酶（如胰蛋白酶）作用于特定的肽链位点，将多肽裂解成较小的片段。随后，通过一定的分离检测手段（如高效液相色谱，HPLC）形成特征性指纹图谱。

这些图谱中的每个峰都代表一个特定的肽段，通过比对图谱可以确定多肽的序列和结构信息，从而进行鉴别和检测。

2.2.3 高级结构

在药物鉴别过程中，高级结构检测的结果可以与已知多肽药物的结构数据进行比对，可以判断待测多肽药物是否与已知药物具有相同的结构特征，从而确认其身份。高级结构的检测方法在本文2.1.2中已经详细讲解。

2.2.4 生物法

生物活性检测法基于多肽药物在生物体内与特定靶点相互作用后产生的生物学效应。这些效应可能包括细胞增殖、分化、凋亡、代谢调节、信号传导等多种生物过程。通过测定这些生物学效应，可以评估多肽药物的生物活性，从而鉴别其真伪。

以某多肽药物A为例，该药物预期具有促进肿瘤细胞凋亡的生物活性。为了鉴别其真伪，可以采用以下生物活性检测法：

选择生物模型：选择对多肽药物A敏感的肿瘤细胞系作为生物模型。

实验方案：设置不同浓度的多肽药物A处理组和一个空白对照组（不加药物处理），在特定时间点收集细胞样本进行检测。

实施实验：将多肽药物A按设定浓度梯度加入肿瘤细胞系中培养一定时间后收集细胞样本，采用流式细胞术等方法检测细胞凋亡率等指标。

数据分析：收集各组细胞的凋亡率数据并进行统计分析，比较不同浓度处理组与对照组之间的差异以及各处理组之间的差异。

结果判断：如果实验结果显示多肽药物A处理组的细胞凋亡率显著高于对照组且呈浓度依赖性增加趋势，则表明该多肽药物A具有促进肿瘤细胞凋亡的生物活性且活性较强；反之则表明其生物活性较弱或不存在预期的生物活性。

2.3 检查

2.3.1 氨基酸比值

同2.2.1 氨基酸组成分析

2.3.2 有关物质

2.3.2.1 聚集体杂质

2.3.2.2 三氟乙酸残留

三氟乙酸（TFA）是多肽合成和纯化过程中常用的溶剂和离子对试剂，但其残留可能对药物的纯度产生影响。通过检测TFA的残留量，可以确保多肽药物的纯度符合既定的质量标准。

同时，TFA的残留还可能影响多肽药物的稳定性和药效。过高的TFA残留可能导致药物在储存和使用过程中发生降解或变性，从而影响其治疗效果和安全性。

常用检测方法：

高效液相色谱法（HPLC）

HPLC具有灵敏度高、选择性好、分离能力强等优点，能够准确检测多肽药物中TFA的残留量。同时，该方法操作简便、稳定性好，适用于大规模的药物质量控制。

离子色谱法（IC）

IC在检测多肽药物中TFA残留时，同样表现出良好的线性关系、低检测限和高回收率等优点。此外，该方法还具有操作简单、稳定性好等特点。

除了HPLC和IC外，还有气相色谱法（GC）、气质联用（GC-MS）等方法可用于TFA的检测。然而，由于TFA的极性较强且易挥发，GC法可能无法满足灵敏度要求；而GC-MS法则结合了GC的高分离能力和MS的高灵敏度优势，但操作相对复杂且成本较高。

2.3.3 反离子含量

多肽类药物在合成和纯化过程中，常常需要引入反离子以调节药物的溶解性、稳定性和药效。常见的反离子类型主要包括以下几种：

醋酸盐

醋酸盐是多肽药物中最常用的反离子之一，其性质稳定，对药物的理化性质影响较小。绝大多数多肽药物的反离子为醋酸盐，如许多肽类激素和生长因子等。

三氟乙酸盐（TFA盐）

虽然使用较少，但某些特定的多肽药物或诊断试剂会采用TFA盐作为反离子，如corticorelin ovine和bivalirudin等。

扑酸盐（Pamoate，也称双羟萘酸盐）

扑酸盐是一种疏水性反离子，其多个氧原子的存在利于氢键体系的形成，可促进化合物在水中的溶解。如triptorelin等黄体生成素释放激素（LHRH）的合成十肽激动剂类似物，采用了扑酸盐作为反离子，以影响药物的溶出速率。

盐酸盐

盐酸盐也是一种常见的反离子，但其应用相对较少。如Gramicidin D和Glucagon recombinant等少数多肽药物/诊断试剂采用了盐酸盐作为反离子。

其他反离子

除了上述常见的反离子外，还有多库酯、十二烷基硫酸盐、油酸盐等疏水性反离子在多肽药物中也有应用，特别是在口服多肽制剂的研发中，这些疏水性反离子能够增加药物的亲脂性，提高药物的膜通透性和生物利用度。

对于多肽类药物中反离子的检测，常用的方法主要包括以下几种：

高效液相色谱法（HPLC）：HPLC是检测多肽药物中反离子含量的常用方法，可以准确测定药物中各种反离子的含量。

离子色谱法（IC）：对于某些特定的反离子，如氟化物等，IC具有更高的灵敏度和选择性，因此也是检测多肽药物中反离子含量的重要方法之一。

质谱法（MS）：结合HPLC使用的LC-MS技术可以对多肽药物中的反离子进行更加精确的定性和定量分析。

紫外分光光度法（UV）：对于含有特定氨基酸（如酪氨酸或色氨酸）的多肽药物，可以通过测定其在特定波长下的吸光度来间接推算反离子的含量。但需要注意的是，这种方法通常只适用于含有特定吸收基团的多肽药物。

2.4 含量测定

相较于小分子药物直接测定活性物质外，多肽类药物还有一些间接的、辅助的含量测定手段。

2.4.1 氨基酸含量测定多肽含量

多肽类药物通过氨基酸含量测定多肽含量的方法，主要基于多肽由特定序列的氨基酸组成这一基本事实。然而，直接通过氨基酸含量来测定多肽的整体含量并不常见，因为多肽的完整性、序列以及可能存在的修饰都会影响其生物活性和药理作用。

一种间接的方法是通过测定多肽水解后氨基酸的总量来估算多肽的含量，但这需要一系列复杂的步骤和精确的测定技术。具体步骤如下：

水解多肽：首先，需要将多肽样品进行水解，通常使用酸水解（如6N HCl）或酶水解（如胰蛋白酶）等方法，将多肽链断裂成单个的氨基酸。需要注意的是，水解过程中应尽量避免氨基酸的破坏或损失。

氨基酸分离与测定：水解后的氨基酸混合物需要通过适当的方法进行分离和测定。常用的方法包括高效液相色谱法（HPLC）、氨基酸分析仪等。这些技术能够分离并定量测定各种氨基酸的含量。

计算多肽含量：通过测定水解后氨基酸的总量，并结合多肽的氨基酸序列和分子量信息，可以间接计算出原始多肽的含量。然而，这种方法存在较大的误差和不确定性，因为水解过程中可能会有氨基酸的损失或破坏，同时不同氨基酸的回收率也可能存在差异。

因此，在实际应用中，通常不会直接通过氨基酸含量来测定多肽的含量。而是采用更直接、更准确的方法，如紫外分光光度法、高效液相色谱法（HPLC）、质谱法等，这些方法能够直接测定多肽的含量，并具有更高的灵敏度和准确性。

2.4.2 N含量测定多肽含量

多肽类药物通过N含量测定多肽含量的方法，主要基于多肽分子中含有氮元素（N）这一事实。氮元素是多肽分子中氨基酸残基的重要组成部分，因此，通过测定多肽样品中的氮含量，可以间接推算出多肽的含量。

N含量测定

测定多肽样品中的N含量，常用的方法有凯氏定氮法、达乌超微量分析法等。

凯氏定氮法：通过反应样品与亚硝酸钠、稀硫酸和重铁盐形成深蓝色络合物，并利用比色法或滴定法来测定N含量。该方法被广泛应用于数量分析和固体样品分析领域，具有较高的准确性和可靠性。

达乌超微量分析法：基于达乌试剂与N元素形成稳定的络合物，并通过柱色谱技术进行分离和检测。该方法具有高灵敏度、准确性和重复性好等优点。

计算多肽含量

根据测定的N含量和多肽分子中N元素的平均含量（或理论含量），可以计算出多肽的含量。这通常涉及到一个转换因子或比例系数，该系数取决于多肽的氨基酸组成和序列。

和通过氨基酸测定含量一样，通过N含量测定多肽含量也是一种间接但常用的方法，因此较少实际应用。

三、药物分析知识补充

3.1 圆二色谱法（CD）

圆二色谱法（Circular Dichroism, 简称CD）是一种广泛应用于生物化学、药物化学及材料科学等领域的分析方法，特别是在测定蛋白质、核酸等生物大分子的二级和三级结构方面，具有不可替代的地位。

基本原理

圆二色谱法的基本原理基于光学活性物质对左旋和右旋圆偏振光（Circularly Polarized Light, CPL）的不同吸收特性。光学活性物质，如手性分子（具有镜像对称但无法完全重合的分子），对左旋（L-CPL）和右旋（R-CPL）圆偏振光的吸收系数（ε）是不相等的，即εL ≠ εR，这种现象称为圆二色性（Circular Dichroism）。通过测量这种吸收系数的差异（Δε = εL - εR），并以波长为横坐标，Δε为纵坐标作图，即可得到圆二色光谱图。

计算公式

在圆二色谱法中，一个重要的参数是摩尔椭圆度（θ），它反映了圆偏振光通过样品后变为椭圆偏振光的程度。摩尔椭圆度与Δε之间的关系可以通过以下公式表示：

或者，更常见地，根据Lambert-Beer定律，椭圆率θ可以近似表达为：

其中：

l 是介质厚度（如样品池的光径），通常以厘米（cm）为单位。

c 是光活性物质的浓度，通常以摩尔每升（mol/L）为单位。

Δϵ 是左旋和右旋圆偏振光的吸收系数之差。

为了更直观地解释圆二色谱法的基本原理，我们可以想象一个场景：假设你是一位建筑师，正在设计一座复杂的桥梁。这座桥梁由许多钢索和支撑结构组成，它们以特定的方式交织在一起，形成了桥梁的稳定结构。这些钢索和支撑结构之间的相对位置和方向，决定了桥梁的整体形状和承重能力。

现在，假设你无法直接看到桥梁的内部结构，但你可以使用一种特殊的光学仪器（即圆二色谱仪）来探测桥梁对光线的反应。这种仪器能够发出左旋和右旋的圆偏振光，并测量它们穿过桥梁后吸收或反射的差异。

当你用不同波长的圆偏振光照射桥梁时，你会注意到某些波长的光更容易通过桥梁的某些部分，而其他波长的光则受到更大的阻碍。这种差异就像桥梁内部结构的“指纹”，它揭示了钢索和支撑结构是如何排列和相互作用的。

在生物化学中，多肽（由多个氨基酸连接而成的链状分子）就像这座复杂的桥梁。多肽的氨基酸序列决定了其一级结构，但更重要的是，这些氨基酸之间的相互作用（如氢键、疏水作用、离子键等）形成了多肽的二级（如α-螺旋、β-折叠）和三级结构（整体的三维形状）。

圆二色谱法就是那位“光学建筑师”，它利用多肽对左旋和右旋圆偏振光的不同吸收特性，来“探测”多肽内部的结构信息。通过测量不同波长下多肽的圆二色光谱，研究人员可以推断出多肽的二级和三级结构，比如哪些区域形成了α-螺旋，哪些区域形成了β-折叠，以及这些结构是如何相互连接的。

这种方法之所以有效，是因为不同的蛋白质结构对光的吸收特性是不同的。例如，α-螺旋结构在远紫外区域（约190-250nm）有一个特征性的正峰和一个负峰，而β-折叠结构则在该区域表现出不同的光谱特征。因此，通过比较实验得到的圆二色光谱与已知结构的光谱数据库，研究人员可以解析出多肽的高级结构。

在药物分析中，了解多肽的高级结构对于理解其生物活性、设计靶向药物以及优化药物与多肽的相互作用至关重要。圆二色谱法作为一种非破坏性的、高灵敏度的分析方法，为这一领域的研究提供了有力的工具。

3.2 傅里叶变换红外光谱法(FTIR)

傅里叶变换红外光谱法（Fourier Transform Infrared Spectroscopy, FTIR）是一种基于红外光谱学的分析方法，它通过测量样品对红外光的吸收来揭示样品的化学结构和组成。

基本原理

FTIR的基本原理基于红外光谱学，它利用红外辐射与物质分子间的相互作用来获取信息。红外辐射是电磁波谱中波长较长的一部分，通常在0.75至1000微米范围内，但FTIR主要关注2.5至25微米（即4000至400 cm^-1波数）的中红外区域。当红外光照射到样品上时，样品中的分子会吸收与其振动频率相匹配的红外光，导致分子振动能级的跃迁。这种吸收作用取决于分子的化学结构和官能团，因此，不同化合物在红外光谱中会呈现出独特的吸收峰。

FTIR的关键在于使用傅里叶变换技术将光信号从时间域转换为频域，从而得到清晰的红外光谱图。在FTIR光谱仪中，红外光源发出的光经过干涉仪产生干涉图，该干涉图包含了所有频率成分的信息。然后，通过傅里叶变换算法处理干涉图，将其转换为频率域的光谱图，其中横坐标代表波数（频率），纵坐标代表吸光度或透过率。

计算公式

虽然FTIR的核心是傅里叶变换技术的应用，但直接描述FTIR光谱的生成并不涉及一个简单的公式。傅里叶变换的数学表达式为：

其中：

F(ω) 是变换后的频谱函数，表示信号在频率域中的分布。

f(t) 是原始信号，在FTIR中，这通常是干涉图或随时间变化的红外光强度。

ω 是角频率，与光谱中的波数（σ 或 ν~，常用 cm−1 表示）相关，但注意在纯数学表达式中通常使用 ω。

t 是时间变量。

i 是虚数单位，满足 i2=−1。

e−iωt 是复指数函数，用于将信号从时间域转换到频率域。

3.3 拉曼光谱法

拉曼光谱法（Raman spectroscopy）是一种基于拉曼散射效应的振动光谱技术，它能够为我们提供分子内部振动、转动等低频模式的信息，进而揭示样品的化学结构和组成。

基本原理

拉曼光谱法的基本原理源于印度科学家C.V.拉曼所发现的拉曼散射现象。当一束单色光（如激光）照射到物质表面时，大部分光会发生弹性散射，即散射光的频率与入射光相同，这种散射称为瑞利散射。然而，还有一小部分光会发生非弹性散射，即散射光的频率与入射光不同，这种散射就是拉曼散射。拉曼散射光的频率变化与物质分子的振动能级有关，因此通过分析拉曼散射光谱，我们可以得到分子振动、转动等方面的信息。

计算公式

虽然拉曼光谱的完整理论涉及量子力学和分子振动理论，但在这里我们可以给出一个简化的概念性公式来说明拉曼散射的频率变化：

其中：

Δν 是散射光与入射光之间的频率差（拉曼位移），单位为波数（cm−1）。

νscattered 是散射光的频率。

νincident 是入射光的频率。

Evib 是分子振动能级的能量差。

h 是普朗克常数。

注意：这里的“±”符号表示斯托克斯散射（负号）和反斯托克斯散射（正号），但在实际应用中，我们通常只关注斯托克斯散射。

四、总结

多肽药物，作为连接小分子化学药物与蛋白质生物药之间的桥梁，其质量属性具有其特殊性和复杂性。

在鉴别项的研究中，多肽药物的氨基酸组成、肽图及高级结构分析构成了其身份确认的核心。氨基酸组成分析通过精确测定多肽链中各类氨基酸的种类与比例，为药物的基本结构提供了基础数据支持。而肽图技术，则利用酶解或化学断裂将多肽切割成较小的片段，并通过电泳或色谱等手段进行分离与鉴定，进一步揭示了多肽的序列信息及可能的修饰位点。此外，高级结构的研究，如二级、三级乃至四级结构的解析，对于理解多肽药物的构效关系、稳定性及生物活性至关重要。这些鉴别手段共同构成了多肽药物身份确认的“金标准”，确保了产品的真实性与一致性。

在检查项方面，多肽药物的质量控制更为严苛与细致。氨基酸比值作为衡量多肽纯度与均一性的重要指标，通过比较不同氨基酸之间的相对含量，可以快速识别出可能的杂质或变异体。聚集体杂质的检测，则针对多肽在储存或生产过程中可能形成的无活性或低活性聚集体，这些杂质不仅影响药物的生物利用度，还可能引发免疫反应。三氟乙酸残留作为多肽合成过程中常用的保护基团去除剂，其残留量的严格控制对于保障患者安全至关重要。反离子含量的监测，则关注于多肽药物中可能存在的与带电荷基团结合的离子，这些离子的种类与数量直接影响药物的溶解性、稳定性及药效。

在含量测定项中，本文探讨了两种主要的多肽含量间接测定方法：基于氨基酸含量的测定与基于N含量的测定。前者通过水解多肽并测定水解产物中氨基酸的总量，间接推算出多肽的含量，但该方法存在水解损失、回收率差异等局限性。后者则直接测定多肽样品中的N含量，利用多肽分子中N元素的恒定比例关系，快速准确地计算出多肽的含量。两者均是间接含量测定方法，实际应用较少。

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参考文献

《化学合成多肽药物药学研究技术指导原则》

《化学药物原料药制备和结构确证研究技术指导原则》

《Guidance for Industry for Submission of Chemistry, Manufacturing, and Controls Information for Synthetic Peptide Substances》

《(1503)Quality Attributes of Synthetic Peptide Drug Substances》

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